布鲁氏菌病抗体检测试剂盒使用说明书

布鲁氏菌病抗体检测试剂盒使用说明书
【介绍】
布鲁氏菌病（brucellosis，Bru，布病）抗体检测试剂盒用于检测牛、羊、猪、犬等动物血清中的布鲁氏菌抗体。
本试剂盒采用竞争ELISA法，在酶标板条微孔上预包被布鲁氏菌抗原。在试验中，加入稀释液、待检血清与酶结合物，经过温育后，若样品中含有布鲁氏菌特异性抗体，则与酶结合物中的酶标记抗体竞争板孔中包被的抗原表位，温育后将多余的游离抗体通过洗涤去除；在微孔中加入TMB显色液，经酶催化产生的蓝色信号与样本中的抗体含量成反比，加入终止液终止反应后，用酶标仪450nm波长测定反应孔中的吸光度A值。
【组份】

1	抗原预包被板条	1/2块	7	终止液	6/11ml
2	酶结合物	10/20ml	8	阴性对照	200ul
3	10倍浓缩洗涤液	100ml	9	阳性对照	60ul
4	显色液	11/22ml	10	封板膜	2/4张
5	样本稀释液	100ml	11	说明书	1份
6	稀释板	1/2块

 
【需自备的设备及试剂】
1. 微量移液器：10µl-100µl、100µl-1000µl。
2. 一次性移液器吸头。
3. 量筒：500ml。
4. 96孔板酶标仪。
5. 蒸馏水或去离子水。
6. 洗瓶或洗板机。
 
【样品制备】
取动物全血，按常规方法制备血清，要求血清清亮，无溶血。
【洗涤液的准备】
浓缩洗涤液使用前应恢复至室温，如有盐结晶，摇动使结晶的盐溶解，然后用蒸馏水或去离子水作10倍稀释。稀释好的洗涤液可在4℃存放一周左右。
【注意事项】
1. 试剂盒使用前各试剂应平衡至室温，应将试剂盒各组份放置室温至少1小时以上。使用前应摇匀，使用后放回2-8℃。
2. 不同品种、不同批号试剂盒的试剂组分不得混用，使用试剂时应防止试剂污染。
3. 显色液和终止液对皮肤和眼可能有刺激性，使用时应该注意防护。
4. TMB（显色液）不要暴露于强光和避免接触氧化剂。
5. 检测板拆封后应避免受潮或沾水(未用完的抗原包被板加干燥剂放于自封袋中，并尽快置于2-8℃)。
6. 所有废弃物在丢弃之前应合理处理以免污染。
7. 严格遵守操作说明可以获得最好的结果。操作过程中移液、定时和洗涤等的全部过程必须精确。
8. 抗原包被板为一次性用品，不得重复使用； 
【操作步骤】
1. 在稀释板上按1：40稀释待检血清样本以及阴阳性对照品（195µl样本稀释液+5µl样本血清），并吹打均匀
2. 取预包被的检测板（根据样品多少，可拆开分次使用），将稀释好的待检血清取20µl加入到检测板孔内。同时设阴性对照2孔，阳性对照1孔，取阴性及阳性稀释液各20µl分别加入反应孔中。
3. 然后再加酶结合物80µl/孔，加入反应孔中轻微震荡混匀（勿溢出），盖上封板膜，置37℃温育60分钟。
4. 小心揭开封板膜，甩掉板孔中的溶液，使用工作浓度洗涤液每孔加250ul，后甩去孔内液体，以上步骤重复4-6次，最后在干净吸水纸上拍干。
5. 每孔加显色液100µl，混匀、盖上封板膜37℃闭光显色15分钟。
6. 每孔加终止液50μl，使反应终止，10分钟内测定结果。
【结果判定】
用酶标仪于450nm（630nm作参比波长）读取吸光度OD值。
试验成立的条件是：
 阴性对照(N)OD值>0.5，同时阳性对照(P)阻断率>80%；
计算方法：
PI (阻断率)= {1 —（样品OD值 ÷ 阴性OD均值）}×100%
阴阳性判断：
PI(阻断率)>70%则判断为阳性；
PI≤70%则判断为阴性。
【有限期】
贮存方法： 2 - 8ºC下贮存。
有效期： 12个月。