ELISA直接法测长叶车前花叶病毒（RMV）含量实验步骤

ELISA直接法测长叶车前花叶病毒（RMV）含量实验步骤
 
1. 将不同浓度的待检测RMV溶液作为样品液，在测定板每孔各加250ul,至冰箱（4℃）中孵育过一夜。
2. 孵育后，去除孔穴内抗原溶液，用PBS-Tween20溶液缓缓冲洗孔穴3次，每次3min，然后去净洗涤液。
3. 每孔穴加250ulRMV的酶标记抗体溶液（用1%牛血清白蛋白的PBS- ween20稀释）在恒温箱（37℃）里孵育3-6h,或6℃下过一夜。
4. 去除孔穴酶标记抗体溶液，用PBS-Tween20溶液缓缓冲洗3次每次3min，然后去净洗涤液。
5. 每孔穴加入新鲜配备的底物溶液250ul,室温放置0.5h，或者放置出现黄色。
6. 加入50ul3N NaOH，终止反应。
7. 对每孔穴的黄色溶液，测定449nm波长处的吸光值。
讨论
1. 如该聚苯乙烯塑料微量反应板第一次使用，应分别用标准浓度的RMV溶液、RMV的抗血清及RMV与它的IgG形成的免疫结合物，进行期盼滴定法来测该聚苯乙烯塑料微量反应板对RMV抗原和它的抗体的吸附能力。
2. 在正式测样品前，用0.1mol/L pH9.6碳酸盐缓冲液配置各种标准浓度的RMV溶液，依照实验步骤测定RMV各种标准浓度的A449nm值，以病毒标准浓度为横坐标，A449nm值为纵坐标绘制标准曲线，由此可以测出RMV包被的最适合浓度。
3. 测出原始底物的吸光值，以便核准数据。
4. 对照标准曲线，就可算出样品液中RMV的含量。
5. 如无牛血清白蛋白，可用0.1%白明胶代替。
6. 对于不稳定的病毒，用中性缓冲液稀释。
7. 如有ELISA测定仪，可快速测定。
上海研谨生物科技有限公司专业提供科研试剂产品，主要包括高端化学试剂、生物学试剂、免疫学检测，ELISA试剂盒、生化试剂盒、分析标准品、对照品、标准物质、食品安全检测试剂、动物疫病类检测产品、兽药残留检测试剂、细胞培养服务等，应用覆盖药物分析领域、食品安全领域、聚合物研究领域、环境监测领域，客户广泛分布于食品、制药、第三方检测、环境测试机构、化工、科研院校、生物工程等行业。
主营：
1.生化试剂、标准品对照品、标准物质
2.ELISA试剂盒、淋巴细胞分离液、分离液试剂盒
3.血清、细胞：原装进口细胞、国产肿瘤细胞、国产正常细胞、肿瘤耐药细胞
4.食品安全检测试剂、动物疫病类检测产品、兽药残留检测试剂
5.耗材：常用实验耗材、移液器·