cck-8试剂盒、细胞增殖、细胞毒性检测试剂盒 CCK-8试剂盒 Cell Counting Kit-8 CK04 检测原理： ◆ Cell Counting Kit简称CCK8,(CCK-8/WST-8)试剂盒，是一种基于WST-8（化学名：2-(2-甲氧基-4-硝***基)-3-(4-硝***基)-5-(2,4-二磺基***)-2H-四唑单钠盐）的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。 ◆ WST-8属于MTT的升级产品，工作原理为：在电子耦合试剂存在的情况下，可以被线粒体内的脱氢酶还原生成高度水溶性的橙黄色的甲臜产物（formazan）。颜色的深浅与细胞的增殖成正比，与细胞毒性成反比。使用酶标仪在450mM波长处测定OD值，间接反映活细胞数量。 ◆ CCK法应用非常广泛，如药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验以及生物因子的活性检测等。 CCK-8试剂盒 Cell Counting Kit-8 CK04 CCK方法的优势： ◆ 表1 CCK法与其他细胞增殖/毒性检测方法的优势比较 检测方法 MTT法 XTT法 WST-1法 CCK法 甲臜产物的水溶性 差（需加有机溶剂溶解再检测） 好 好 好 产品性状 粉末 2瓶溶液 溶液 1瓶溶液 使用方法 配成溶液后使用 现配现用 即开即用 即开即用 检测灵敏度 高 很高 很高 高 检测时间 较长 较短 较短 最短 检测波长 560-600nm 420-480nm 420-480nm 430-490nm 细胞毒性 高，细胞形态完全消失 很低，细胞形态不变 很低，细胞形态不变 很低，细胞形态不变 试剂稳定性 一般 较差 一般 很好 批量样品检测 可以 非常适合 非常适合 非常适合 便捷程度 一般 便捷 便捷 非常便捷 ◆ 酚红和血清对CCK法的检测不会造成干扰； ◆ 细胞毒性非常低，因此加入WST-8显色后，可以在不同时间反复用酶标仪读数从而找到最佳测定时间。 CCK法的操作步骤（更多内容请见说明书）： 实验一：细胞活性检测 1、在96孔板中接种细胞悬液（100μL/孔）。将培养板放在培养箱中预培养（37℃,5% CO2）。 2、向每孔加入10 μL CCK溶液（注意不要在孔中生成气泡，它们会影响OD值的读数）。 3、将培养板在培养箱内孵育1-4小时。 4、用酶标仪测定在450nm处的吸光度。 5、若暂时不测定OD值，可以向每孔中加入10 μL 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。24小时内测定，吸光度不会发生变化。 实验二：细胞增殖-毒性检测 1、在96孔板中配置100μL的细胞悬液。将培养板在培养箱预培养24小时（37℃，5% CO2）。 2、向培养板加入10μL不同浓度的待测物质。 3、将培养板在培养箱孵育一段适当的时间（例如：6、12、24或48小时）。 4、向每孔加入10μL CCK溶液（注意不要再孔中生成气泡，它们会影响OD值的读数）。 5、将培养板在培养箱内孵育1-4小时。 6、用酶标仪测定在450nm处的吸光度。 7、若暂时不测定OD值，可以向每孔中加入10 μL 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。24小时内测定，吸光度不会发生变化。 注意：如果待测物质有氧化性或还原性的话，可在加CCK之前更换新鲜培养基（除去培养基，并用培养基洗涤细胞两次，然后加入新的培养基），去掉药物影响。当然药物影响比较小的情况下，可以不更换培养基，直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。 活力计算： 细胞活力*（％）=[A(加药)-A（空白）]/[A（0加药）-A（空白）] ×100 A（加药）：具有细胞、CCK溶液和药物溶液的孔的吸光度 A（空白）：具有培养基和CCK溶液而没有细胞的孔的吸光度 A（0加药）：具有细胞、CCK溶液而没有药物溶液的孔的吸光度 *细胞活力：细胞增殖活力或细胞毒性活力 CCK-8试剂盒 Cell Counting Kit-8 CK04保存条件： 4℃避光保存一年有效，-20℃避光保存两年有效。 Cell Counting Kit-8（CCK-8试剂盒）是由同仁化学研究所（Dojindo）开发的检测细胞增殖、细胞毒性的试剂盒，为MTT法的替代方法，试剂盒中采用自己开发的水溶性四唑盐-WST-8，在美国，欧洲等国家地区均持有专利，同仁化学研究所于2006年在中国获得了WST-8的注册商标。 CCK-8法与普通的MTT法相比，具有显著特点： ★灵敏度高，数据可靠，重现性好 ★操作简便，省时省力 ★水溶性，不需要换液，尤其适合于悬浮细胞 ★无需***性同位素和有机溶剂，对细胞毒性低 ★为1瓶溶液，毋需预制，即开即用 ★适合于高通量药物筛选 CCK-8用途：药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验 CCK-8试剂盒在国内知名科研院所、重点大学、三甲医院被广泛应用，国际认可度高，使用CCK-8发表的中外文献达600多篇，其中截止08年底SCI影响因子IF＞10分的论文有37篇，最高IF26.5分 [Heterozygosity with respect to Zfp148 causes complete loss of fetal germ cells during mouse embryogenesis,Nature Genetics 33, 172 - 176 (01 Feb 2003)] CCK-8试剂与MTT等方法灵敏度比较 CCK-8试剂毒性：CCK-8和其他检测方法对比可以得出——CCK-8对细胞几乎无毒性，不伤害细胞，细胞可重复利用