“XXXX”动物骨髓中性粒细胞分离液KIT说明书
 
技术文档编号：TBD0037SOP
 
【产品规格】
 
200ml/Kit
 
【产品组成】
 
为方便广大用户使用，试剂内容如下：
 

	名称	产品编号	规格
A	分离液 1		200ml
B	试剂 F（赠品）	F2013TBD	200ml
C	样本稀释液（赠品）	2010C1119	200ml
D	清洗液（赠品）	2010X1118	200ml
E	红细胞裂解液（赠品）	NH4CL2009	100ml
F	说明书		1 份

 
【实验前准备】
 
适用仪器：最大离心力可达 1200g 的水平转子离心机
 
【检验方法】
 
全过程样本、试剂及实验环境均需在 20±2℃的条件下进行。
 

• 首先制备骨髓单细胞悬液，制备方法详见“骨髓冲洗单细胞悬液制备技术”。

 

• 取一支 15ml 离心管，依次小心加入分离液 1。

 

• 用吸管小心吸取细胞悬液样本加于分离液之液面上，400-650g ，离心 20-30min（注：如改变样本及分离液用量，需相应调整离心力及离心时间，具体离心条件需客户自行摸索，以达到最佳分离效果）。

 

• 离心后，离心管中将出现两层环状乳白色细胞层，上层细胞为单个核细胞层，下层细胞为中性粒细胞层。

 

• 用吸管小心吸取分离液中的中性粒细胞层，如有红细胞混杂则加入适量红细胞裂解液（产品编号：NH4CL2009）将红细胞裂解（具体方法见“红细胞裂解液使用说明”）即得目的细胞。

 

• 将获得的细胞层移至另一 15ml 离心管中，向所得离心管中加入 10ml 清洗液（产品编号：

 
2010X1118），混匀细胞。
 

• 250g，离心 10min。

 

• 弃上清。

 

• 用吸管以 5ml 清洗液（产品编号：2010X1118）重悬所得细胞。

 

• 250g，离心 10min。

 

• 重复 8、9、10，弃上清后以 0.5ml 后续实验所需相应液体重悬细胞。

 
分离图例：
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
【注意事项】
 

• 全过程样本、试剂及实验环境均需在 20±2℃的条件下进行。为获得最佳的实验结果，需在取样 2h 内进行实验。

 

• 本实验最好不使用高聚合材质（如聚苯乙烯）的塑料制品，应使用无静电、低静电离心管及未经碱处理过后的玻璃制品，因为静电作用将导致细胞贴壁、碱处理的玻璃表面会变成毛面，影响细胞分离效果。

 

• 分离液用量大于骨髓单细胞悬液样本量时，分离效果更佳。

 

• 如实验后细胞得率或活性过低，请联系技术支持以寻求帮助.

 
【储存条件及有效期】
 
常温保存，有效期 2 年。本品易感染细菌，需无菌条件操作。无菌条件下操作，启封后置常温保存。如 4℃保存，本分离液易出现白色结晶，影响分离效果。
【参考值（参考范围）】
 
本实验中性粒细胞提取率大于 80%。