• 取白色环状细胞层，加 3-5 倍体积清洗液混匀，250g 离心 10min，重复洗涤 2-3 次，获得目的细胞（如仍有少量红细胞混杂，使用红细胞裂解液去除红细胞）。

 
分离图例：
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
【注意事项】
 

• 全过程样本、试剂及实验环境均需在 20±2℃的条件下进行。为获得最佳的实验结果，需在取样 2h 内进行实验。

 

• 本实验最好不使用高聚合材质（如聚苯乙烯）的塑料制品，应使用无静电、低静电离心管及未经碱处理过后的玻璃制品，因为静电作用将导致细胞贴壁、碱处理的玻璃表面会变成毛面，影响细胞分离效果。

 

• 分离液用量大于骨髓单细胞悬液样本量时，分离效果更佳。

 

• 如实验后细胞得率或活性过低，请联系技术支持以寻求帮助.

 

• 请勿使用具有红细胞保护成分的抗凝剂，否则影响分离效果（离心后，红细胞不能完全沉至离心管底部）。

 
【储存条件及有效期】
 
常温保存，有效期 2 年。本品易感染细菌，需无菌条件操作。无菌条件下操作，启封后置常温保存。如 4℃保存，本分离液易出现白色结晶，影响分离效果。
 
【参考值（参考范围）】
 
本实验中性粒细胞提取率大于 80%。
 
【相关实验技术方案】

• 骨髓冲洗单细胞悬液制备技术。

 

• 所获得中性粒细胞的培养技术。

 

• 所获得中性粒细胞的核酸提取技术。

 

• 所获得中性粒细胞的鉴定方法A.流式细胞技术B.免疫组化技术

 
C.原位杂交技术
 
D.PCR 技术
 
【可能存在的问题及解决方法】
 
1. 由于血液粘度、细胞密度等差异可能造成的问题及解决方案如下表所示：
 

出现情况	出现原因	建议解决方案
离心后目的细胞存在于血浆层或稀释液层	转速过小或离心时间过短	适当增减转速
离心后目的细胞存在于分离液中	转速过大或离心时间过长
离心后白环层弥散	细胞密度过大	调整细胞密度
离心后白环层太浅或看不见	细胞密度过小

 

• 本分离液分离细胞的原理为密度梯度离心，其密度与温度、大气压等密切相关。不同地区客户可根据当地情况对离心条件进行适当调整。建议对离心条件进行调整时，恒定离心时间，对离心转速进行调整。

 

• 本分离液依照国际标准，全部使用药用级原料，性能指标与国产同类产品略有不同，可能出现红细胞沉降不完全的情况，可以适当加大离心转速。

 
注：在对离心条件进行调整时，离心转速的加减以 50-100g 为基数，直至达到最佳分离效果，
 
离心力最小不得小于 400g，最大不得大于 1200g。离心时间以 20-30min 为准。