2010X1118），混匀细胞。
 

• 250g，离心 10min。

 

• 弃上清。

 

• 用吸管以 5ml 清洗液（产品编号：2010X1118）重悬所得细胞。

 

• 250g，离心 10min。

 

• 重复 7、8、9，弃上清后以 0.5ml 后续实验所需相应液体重悬细胞。

 
情况 B：血液样本量大于等于 5ml 时，实验方法如下：
 

• 取一支适当的离心管，依次小心加入分离液 1 及分离液 2（分离液 1 与分离液 2 比例 2：1）,试剂总量与稀释后的样本量相等。

 

• 将血液样本小心加于分离液之液面上，550-750g（最大离心力可至 1000g），离心 20-30min。（注：根据血液样本量确定离心条件，血液量越多，离心力越大，离心

 
时间越长，具体离心条件需客户自行摸索，以达到最佳分离效果。加入血液样本后，样本及分离液总体积不得超过离心管总体积的三分之二）。
 

• 剩余步骤同“情况 A”中步骤 3 至步骤 10。

 
分离图例
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
【注意事项】
 

• 全过程样本、试剂及实验环境均需在 20±2℃的条件下进行。为获得最佳的实验结果，最好在取血 2h 内进行实验，血液存放时间越长，细胞分离效果越差。血液放置超过 6h 后分离效果更差甚至不能达到分离目的。

 

• 本实验最好不使用高聚合材质（如聚苯乙烯）的塑料制品，应使用无静电、低静电离心

 
 
管及未经碱处理过后的玻璃制品，因为静电作用将导致细胞贴壁、碱处理的玻璃表面会
 
变成毛面，影响细胞分离效果。
 

• 分离液用量大于血液样本时，分离效果更佳。

 

• 血液样本不需稀释，直接进行分离即可。

 

• 如实验后细胞得率或活性过低，请联系技术支持以寻求帮助，具体联系方式详见下方生产企业信息。

 
【储存条件及有效期】
 
常温保存，有效期 2 年。本品易感染细菌，需无菌条件操作。无菌条件下操作，启
 
封后置常温保存。如 4℃保存，本分离液易出现白色结晶，影响分离效果。
 
【参考值（参考范围）】
 
本实验中性粒细胞提取率大于 80%。
 
下表为成年人外周血中各种细胞的数量及比例，用户可适当进行参考。
 

	红细胞		白细胞		血小板
		（4.0-10.0）×109
含量（个/L）	（4.0-5.5）×1012	中性粒细胞	淋巴细胞	单核细胞	（1.0-3.0）×1011
		50%-70%	20%-40%	3%-8%
【相关实验技术方案】

 

• 所获得中性粒细胞的培养技术。

 

• 所获得中性粒细胞的核酸提取技术。

 

• 所获得中性粒细胞的鉴定方法A.流式细胞技术B.免疫组化技术C.原位杂交技术

 
D.PCR 技术
 
【可能存在的问题及解决方法】
 
1. 由于血液粘度、细胞密度等差异可能造成的问题及解决方案如下表所示：
 

出现情况	出现原因		建议解决方案
离心后目的细胞存在于血浆层或稀释液层	转速过小或离心时间过短		适当增减转速
离心后目的细胞存在于分离液中	转速过大或离心时间过长
离心后白环层弥散	细胞密度过大		调整细胞密度

 

离心后白环层太浅或看不见	细胞密度过小

 

• 本分离液分离细胞的原理为密度梯度离心，其密度与温度、大气压等密切相关。不同地区客户可根据当地情况对离心条件进行适当调整。建议对离心条件进行调整时，恒定离心时间，对离心转速进行调整。

 

• 本分离液依照国际标准，全部使用药用级原料，性能指标与国产同类产品略有不同，可

 
能出现红细胞沉降不完全的情况，可以适当加大离心转速。
 
注：在对离心条件进行调整时，离心转速的加减以 50-100g 为基数，直至达到最佳分离效果，
 
离心力最小不得小于 400g，最大不得大于 1200g。离心时间以 20-30min 为准。