细菌蛋白抽提试剂盒
 
目录号：YJ0888S（25 preps）
YJ0888M（100 preps）
 
保存条件：Lysozyme、DNaseⅠ、Protease Inhibitor Cocktail：-20℃，其它组分：室温
 
产品内容
 

Component	YJ0888S	YJ0888M
	25 preps	100 preps
Bacterial Protein Extraction Reagent	25 ml	100 ml
Protease Inhibitor Cocktail	250 μl	1 ml
Lysozyme （50 mg/ml）	50 μl	200 μl
DNaseⅠ（1,000 U/ml）	25 μl	100 μl

 
产品简介
 
细菌蛋白抽提试剂使用温和的非离子型去污剂，适用于大肠杆菌及昆虫细胞表达的重组蛋白提取。提取过程中不需进行超声破碎，有效避免了外源蛋白的污染。本产品可应用于从细菌裂解液中提取可溶性蛋白。细菌蛋白抽提试剂盒在抽提试剂的基础上添加了溶菌酶、DNaseⅠ和蛋白酶抑制剂混合物，可提高蛋白提取效率并减轻因DNA引起的粘稠现象，有效避免蛋白降解。所提取的蛋白保持了生物学活性，可进行IP、Western blot、蛋白纯化等下游操作。
 
注意事项
 
1．本产品适用于从新鲜或冻存细菌和昆虫细胞中提取蛋白。
 
2．本品采用Tris缓冲系统，蛋白提取后的纯化操作，请使用相同的缓冲系统。
 
3．使用本产品获得的蛋白裂解液，可用BCA或Bradford法进行蛋白定量。
 
4．对于特殊的菌株，如果抽提效果不理想，可在抽提蛋白前冰冻样品。
 
5．根据具体情况，可在本产品中加入蛋白酶抑制剂、盐、螯合剂、还原剂等。

操作步骤
 
● 昆虫细胞蛋白提取
 
1．低速离心收集细胞。每1 ml Bacterial Protein Extraction Reagent中加入10 μl Protease Inhibitor Cocktail即为1×工作液。
2．称量细胞湿重，按10 ml/g的量加入1×工作液。
 
3．重悬后，冰上孵育20分钟（冰上放置时间应根据细胞类型不同进行调整）。
 
4．15,000×g离心15分钟，分离可溶性蛋白。
 
● 细菌可溶性蛋白提取
 
1．5,000×g离心10分钟，收集菌体。
 
2．可选步骤：每1 ml Bacterial Protein Extraction Reagent中加入1 μl DNase I（1,000 U/ml）、 2 μl Lysozyme（50 mg/ml）和10 μl Protease Inhibitor Cocktail，涡旋震荡混匀。
3．按照每克菌体沉淀加入20 ml Bacterial Protein Extraction Reagent的比例，向菌体沉
 
淀中加入抽提液，充分涡旋或用移液器上下吹打直至菌体完全重悬。
 
4．重悬后，室温孵育10-15分钟（放置时间应根据细胞类型不同进行调整）。
 
5．15,000×g离心5分钟。
 
6．转移上清至新的离心管中（上清中即为可溶性蛋白），进行蛋白定量及下游实验。
 
注意：如目的蛋白以包涵体形式存在，可使用包涵体蛋白溶解液（CW0007）进行溶解或优化表达
 
条件增加可溶性蛋白的表达。
 
常见问题
 

问题	可能原因	解决方法
目的蛋白不溶	目的蛋白表达为包涵体	优化表达条件或使用包涵体蛋白溶解液
		在蛋白抽提试剂中加入 Lysozyme 和 DNase I
加入Lysozyme 后目的蛋白	温度过低	将使用试剂恢复至室温
仍没有提取出来	Lysozyme 活性降低或失活	加入更多的 Lysozyme 或更换新的酶
提取物粘度高	DNase I 活性降低或失活	加入更多的 DNase I 或更换新的 DNase I
		将镁离子的终浓度增加至 2 mM
蛋白抽提后仍有大部分蛋	蛋白量过大	加入 Lysozyme 及 DNase I
白存在于沉淀中
蛋白抽提试剂有沉底析出	温度过低	将蛋白抽提试剂恢复至室温