产品类别：外周血白细胞的分离
 
产品编号：WBC1083
 
产品名称：大鼠外周血白细胞分离液试剂盒（分子生物学及细胞培养专用）
 
产品规格：200ml/KIT
 
产品价格：￥650.00元
 
 
本品用于分离大鼠外周血白细胞
 
“XXXX”动物外周血白细胞分离液实验方法
 
（细胞培养及分子生物学专用）
 
技术文档编号：TBD0031SOP
 
【产品规格】
 
200ml/Kit
 
【产品组成】
 
为方便广大用户使用，试剂内容如下：
 

	名称	产品编号	规格
A	XXXX 动物外周血白细胞分离液		200ml
B	样本稀释液（赠品）	2010C1119	200ml
C	清洗液（赠品）	2010X1118	200ml
D	红细胞裂解液（赠品）	NH4CL2009	100ml
E	说明书		1 份

 
【实验前准备】
 
适用仪器：最大离心力可达 1200g 的水平转子离心机
 
【检验方法】
 
全过程样本、试剂及实验环境均需在 20±2℃的条件下进行。
 
首先取抗凝血，根据样本量大小，分以下两种情况：
 
情况 A：血液样本量小于 5ml 时，实验方法如下：
 

• 取一支 15ml 离心管，先加入 5ml 分离液

 

• 用吸管小心吸取血液样本加于分离液液面上，500-800g，离心 20-30min（注：如改变血液样本及分离液用量，需相应调整离心力及离心时间，具体离心条件需客户自行摸索，以达到最佳分离效果。）

 

• 离心后用吸管小心吸取所有环状乳白色细胞层（一层或两层），加入 10 ml 清洗液（产品编号：2010X1118），混匀细胞。250g，离心 10min。重复洗涤 2-3 次，即得所需白细胞。

 

• 如有红细胞残留请使用红细胞裂解液（产品编号：NH4CL2009）裂解红细胞，具体操

 
作方法详见“红细胞裂解液使用说明”。
 
情况 B：血液样本量大于等于 5ml 时，实验方法如下：
 

• 取一支适当的离心管，先加入与样本等量的分离液。

 

• 将血液样本小心加于分离液之液面上，550-850g（最大离心力可至 1000g），离心20-30min。（注：根据血液样本量确定离心条件，血液量越多，离心力越大，离心时间越长，具体离心条件需客户自行摸索，以达到最佳分离效果。加入血液样本后，样本及分离液总体积不得超过离心管总体积的三分之二）。

 

• 剩余步骤同“情况 A”中步骤 3 与步骤 4。

 
【注意事项】
 

• 全过程样本、试剂及实验环境均需在 20±2℃的条件下进行。为获得最佳的实验结果，最好在取血 2h 内进行实验，血液存放时间越长，细胞分离效果越差。血液放置超过 6h 后分离效果更差甚至不能达到分离目的。

 

• 本实验最好不要使用高聚合材质（如聚苯乙烯）的塑料制品，应使用无静电、低静电离心管及未经碱处理过后的玻璃制品，因为静电作用将导致细胞贴壁、碱处理的玻璃表面会变成毛面，影响细胞分离效果。

 

• 分离液用量大于稀释后血液样本时，分离效果更佳。

 

• 当血液样本粘度过高需稀释时，最优稀释方法：将血液与样本稀释液（产品编号：2010C1119）1:1 稀释混匀备用。注：不当的稀释方法会降低细胞得率及活性。如血液样本经过稀释则分离过程中需适当降低离心力和离心时间。

 

• 如实验后细胞得率或活性过低，请联系技术支持以寻求帮助。

 
【储存条件及有效期】
 
常温保存，有效期 2 年。本品易感染细菌，需无菌条件操作。无菌条件下操作，启
 
封后置常温保存。如 4℃保存，本分离液易出现白色结晶，影响分离效果。
 
【参考值（参考范围）】
 
本实验白细胞提取率及纯度大于 80%。
 
下表为成年人外周血中各种细胞的数量及比例，用户可适当进行参考。
 

	红细胞		白细胞		血小板
		（4.0-10.0）×109
含量（个/L）	（4.0-5.5）×1012	中性粒细胞	淋巴细胞	单核细胞	（1.0-3.0）×1011
		50%-70%	20%-40%	3%-8%

 
【相关实验技术方案】

• 所获得白细胞的培养技术。

 

• 所获得白细胞的核酸提取技术。

 

• 所获得白细胞的鉴定方法A.流式细胞技术B.免疫组化技术

C.原位杂交技术
 
D.PCR 技术
 
【可能存在的问题及解决方法】
 
1. 由于血液粘度、细胞密度等差异可能造成的问题及解决方案如下表所示：
 

出现情况	出现原因	建议解决方案
离心后目的细胞存在于血浆层或稀释液层	转速过小或离心时间过短	适当增减转速
离心后目的细胞存在于分离液中	转速过大或离心时间过长
离心后白环层弥散	细胞密度过大	调整细胞密度
离心后白环层太浅或看不见	细胞密度过小

 

• 本分离液分离细胞的原理为密度梯度离心，其密度与温度、大气压等密切相关。不同地区客户可根据当地情况对离心条件进行适当调整。建议对离心条件进行调整时，恒定离心时间，对离心转速进行调整。

 

• 本分离液依照国际标准，全部使用药用级原料，性能指标与国产同类产品略有不同，可能出现红细胞沉降不完全的情况，可以适当加大离心转速。

 
注：在对离心条件进行调整时，离心转速的加减以 50-100g 为基数，直至达到最佳分离效果，
 
离心力最小不得小于 400g，最大不得大于 1200g。离心时间以 20-30min 为准。