劳克坚牢蓝(LFB)属于铜-酞箐染料,在酒精溶液中具有与髓鞘磷脂结合的染色特性。应用LFB髓鞘染色可以很好地显示出神经组织的髓鞘结构。
LFB髓鞘染色实验意义:
LFB染色观察染色阳性纤维的深浅和多少，还可用来定量分析脱髓鞘病变及髓鞘再生等有关髓鞘改变情况。
实验步骤:
(1)石蜡切片脱蜡至水:依次将切片放入二甲苯I 20min-二甲苯I 20min-无水乙醇I 10min-无水乙醇I 10min-95%酒精5min-90%酒精5min-80%酒精5min- 70%酒精5min蒸馏水洗。
(2) 染色:切片置于0.1% LFB染液60°C孵育过夜， 自来水冲洗。
(3)分化:切片放入70%乙醇中(无固定时间) ;切片浸入0.05%碳酸锂中,镜下控制分色时间至分色完全(可见灰质部分颜色变淡) ;如分化不好这两步交替进行几次至镜检满意,水洗。
(4)伊红复染: 0.1%伊红复染1min,水洗。
(5)封片:电吹风吹干或烘箱吹干;二甲苯逶明数分钟，中性树胶封片。
(6)显微镜镜检，图像采集分析。
实验结果:
经髓鞘呈蓝色;其他成分呈红色。
实验技巧:
(1) 切片若为石蜡切片，要在二甲苯中先脱蜡，再至无水乙醇。
(2) 0.05%碳酸锂水溶液分色应该在显微镜下进行，至背景呈灰色为止。70%酒精再次分色时，至背景无色为止。
(3) LFB染色完后， 可用焦油紫溶液或苏木素-伊红复染，这样能更好地显示出细胞的形态。
(4) 复染之后要入正丁醇漂洗脱水，这样染色效果更佳。
(5) 溶液配制:劳克坚牢蓝1g, 95%酒精100ml, 10%冰醋酸0.5ml。 混匀后过滤，室温保存。
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